高通量纳米抗体发现服务
纳米抗体的独特理化性质包括相对较小的体积、高亲和力、高特异性、高热稳定性和出色的溶解性。除此之外，纳米抗体的模块化特性使它们可以被引入到常规抗体无法构建的结构中。凭借这些优势，纳米抗体在生物技术和生物医学领域中的应用范围在迅速扩大。
纳米抗体的常规发现流程主要通过噬菌体展示技术进行抗体文库构建和筛选。这种抗体发现方法有很大的局限性，一是原核表达系统产生的偏向性，不同的克隆体生长速度不同，在经过2-3轮筛选后，有些克隆体可能会丢失。二是在筛选过程中缺乏有效的监测方法，使得难以控制。最后，这种方法筛选通量较低，人工手动挑取有限的102-103个克隆体进行分析，所得到的数据仅仅代表实际抗体库多样性的极小部分。
基于酵母表面展示的高通量纳米抗体发现服务
阿帕克生物纳米抗体研发中心将酵母表面展示、细胞流式分选与NGS结合使用，解放常规文库筛选的局限，实验效率翻倍，一次实验可获得超越传统筛选方式的百倍优质克隆！
酵母表面展示流程图
NBbiolab酵母表面展示平台采用“α-凝集素”展示系统，将纳米抗体基因序列和表达标签HA tag基因序列插入至蛋白质支架-Aga2基因的展示质粒载体中，该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长，并通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示，纳米抗体融合蛋白被分泌并锚定在酵母细胞壁上。再结合磁珠及流式分选技术进行多轮筛选，可筛选得到高亲和力、高稳定性的克隆。
纳米抗体发现流程
通过分子克隆技术构建纳米抗体酵母表面展示文库；将抗体文库与荧光标记的抗原分子孵育；通过流式细胞分选仪获取指定条件下特异性结合目标分子的酵母细胞；通过下一代测序（NGS）方法获得抗体序列信息，并进行丰度排序和基于CDR进行cluster聚类，高效获得上百条后选克隆，并且序列置信度高，重组表达后的活性验证阳性率高。这种高性能组合式的抗体发现方法比传统挑克隆测序的方法能够更加全面和高效覆盖抗体的多样性。
HTS SmartSelect 流程图
酵母表面展示VS噬菌体展示
酵母表面展示与噬菌体展示相比，具有显著优势。酵母具有类似于高等真核生物的分泌途径，使蛋白质能够正确地折叠和分泌。与噬菌体表面展示不同的是，使用FACS可以基于亲和力和展示水平筛选库，对于在酵母表面展示中的高亲和力的选择不受表达水平的负面影响，这消除了表达偏向可能引起的任何潜在偏差。此外，酵母表面展示可实时区分仅在抗体亲和力上略有不同的克隆。通过两色染色，可以直接在酵母细胞表面确定抗体亲和力，避免了亚克隆、表达和纯化的需要。这种技术使得在一种展示格式中，可以快速筛选和优化目标抗体的亲和力、稳定性和细胞外表达。
酵母表面展示技术优势
1. 真核翻译机制确保蛋白正确折叠
2. 无偏向性的抗体文库构建
3. 兼容流式分选技术精确控制筛选参数
4. 筛选过程中实时动力学观察
5. 基于抗体亲和力及展示水平进行筛选
6. 基于特定表位进行筛选
NBbiolab技术特色
1. 高质量建库标准，酵母库容可达108
2. 优化信号肽，文库表达率可达到65%~80%
3. 与流式多色分选和NGS测序强力组合
